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高效液相色譜儀會(huì)因?yàn)槟男┮蛩匾鸶蓴_峰

更新時(shí)間:2022-04-20        閱讀:3210
  高效液相色譜法中的干擾峰是廣大色譜工作者甚為頭疼的事情,下面對(duì)高效液相色譜引起干擾峰的因素做一個(gè)簡(jiǎn)單的歸納。
 
  一、試劑/溶劑
 
  高效液相色譜法中,常用的試劑主要是有機(jī)溶劑、各種鹽類及水。有機(jī)溶劑一般多為購買的色譜級(jí),所以出現(xiàn)問題的幾率較小。但是分裝出的有機(jī)溶劑,由于多次使用,被污染的概率較大,因此引入干擾峰的幾率較高。其次是水,水中的雜質(zhì)是干擾峰的主要來源之一,這是大家極易忽視的問題。采集波長(zhǎng)較低的檢測(cè)方法,建議使用高品質(zhì)水,這樣可以避免很多因?yàn)樗|(zhì)帶來的問題。再次是各種鹽類,這也是色譜干擾峰的主要來源之一。
 
  水和無機(jī)鹽引起的干擾峰,比較快捷的解決方案是安裝鬼峰補(bǔ)集柱,這樣可以有效的避免此類干擾。如果使用離子對(duì)試劑,則需選擇不影響離子對(duì)試劑的鬼峰補(bǔ)集柱。
 
  二、器材
 
  干擾峰來源的第二個(gè)方面是流動(dòng)相配制及樣品前處理過程中接觸的各種器材。
 
  首先是流動(dòng)相配制過程中接觸的器材,包括燒杯、玻璃棒、pH計(jì)、濾杯、濾膜、流動(dòng)相瓶等。燒杯、玻璃棒是配制流動(dòng)相首先接觸的器材,因此建議配制流動(dòng)相的燒杯、玻璃棒專用。濾杯實(shí)驗(yàn)人員只要清洗干凈一般不會(huì)帶來污染。需要注意的是,如果過濾含有離子對(duì)的流動(dòng)相,建議增加清洗次數(shù),避免清洗不干凈污染后續(xù)流動(dòng)相。因此,對(duì)濾杯的清洗應(yīng)該建立基本的洗滌規(guī)程,保證實(shí)驗(yàn)人員對(duì)使用的器材清洗到位。濾膜也是干擾峰引入源頭之一。乙腈經(jīng)過有機(jī)系濾膜過濾后,在梯度洗脫中會(huì)引入較大干擾峰。鑒于色譜級(jí)試劑廠家已經(jīng)過膜,且多數(shù)儀器都有脫氣機(jī),所以筆者建議無需再對(duì)甲醇、乙腈等純有機(jī)相過濾。流動(dòng)相瓶引入干擾峰的現(xiàn)象主要出現(xiàn)在夏季,這是由于夏季溫度高,純水相容易滋生細(xì)菌。后續(xù)的流動(dòng)相瓶使用人員清洗不到位,所以導(dǎo)致引入干擾峰。因此流動(dòng)相瓶的清洗要建立嚴(yán)格的洗滌規(guī)程。
 
  再次樣品前處理過程中接觸的器材。前處理過程中接觸的器材主要包括容量瓶、濾頭、注射器及進(jìn)樣瓶。容量瓶的清洗同流動(dòng)相瓶、過濾裝置一樣,要建立良好的清洗規(guī)程。移液器材以及濾頭、注射器,多為塑料制品,其化學(xué)惰性較玻璃制品差,因此容易引入干擾峰。
 
  三、液相系統(tǒng)
 
  與前兩類干擾峰相比,液相系統(tǒng)干擾峰的解決更加困難。液相系統(tǒng)是一個(gè)動(dòng)態(tài)過程,所以此類問題解決過程耗費(fèi)時(shí)間長(zhǎng),而且要求實(shí)驗(yàn)人員有很高的色譜素養(yǎng)。筆者對(duì)此類問題來源主要?dú)w結(jié)為三類:強(qiáng)保留物質(zhì)、離子對(duì)污染和管路滋生細(xì)菌。
 
  首先是強(qiáng)保留物質(zhì)的干擾,其主要特征是寬峰。此類問題多數(shù)發(fā)生在等度洗脫中,梯度洗脫主要出現(xiàn)在高比例有機(jī)相處。這是由于強(qiáng)保留物質(zhì)在當(dāng)次進(jìn)樣中未洗脫出,在后續(xù)進(jìn)樣洗脫出來所致。

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