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原來高效液相色譜系統(tǒng)是由這五個系統(tǒng)組合而成的

更新時間:2020-07-30        閱讀:1830
  高效液相色譜系統(tǒng)主要有進(jìn)樣系統(tǒng)、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)、輸液系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)和分離系統(tǒng)。
 
  1、進(jìn)樣系統(tǒng):一般采用隔膜注射進(jìn)樣器或高壓進(jìn)樣間完成進(jìn)樣操作,進(jìn)樣量是恒定的。這對提高分析樣品的重復(fù)性是有益的。
 
  2、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng):該系統(tǒng)可對測試數(shù)據(jù)進(jìn)行采集、貯存、顯示、打印和處理等操作,使樣品的分離、制備或鑒定工作能正確開展。

  3、高效液相色譜系統(tǒng)中輸液系統(tǒng):該系統(tǒng)包括高壓泵、流動相貯存器和梯度儀三部分。高壓泵的一般壓強(qiáng)為l.47~4.4x107pa,流速可調(diào)且穩(wěn)定,當(dāng)高壓流動相通過層析柱時,可降低樣品在柱中的擴(kuò)散效應(yīng),可加快其在柱中的移動速度,這對提高分辨率、回收樣品、保持樣品的生物活性等都是有利的。流動相貯存錯和梯度儀,可使流動相隨固定相和樣品的性質(zhì)而改變,包括改變洗脫液的極性、離子強(qiáng)度、ph值,或改用競爭性抑制劑或變性劑等。這就可使各種物質(zhì)都能獲得有效分離。
 
  4、檢測系統(tǒng):高效液相色譜常用的檢測器有紫外檢測器、示差折光檢測器和熒光檢測器三種。
  a、紫外檢測器 該檢測器適用于對紫外光(或可見光)有吸收性能樣品的檢測。其特點(diǎn):使用面廣;靈敏度高;線性范圍寬;對溫度和流速變化不敏感;可檢測梯度溶液洗脫的樣品。
  b、示差折光檢測器 凡具有與流動相折光率不同的樣品組分,均可使用示差折光檢測器檢測。目前,糖類化合物的檢測大多使用此檢測系統(tǒng)。這一系統(tǒng)通用性強(qiáng)、操作簡單,但靈敏度低(檢測下限為10-7g/ml),流動相的變化會引起折光率的變化,因此,它既不適用于痕量分析,也不適用于梯度洗脫樣品的檢測。
  c、熒光檢測器 凡具有熒光的物質(zhì),在一定條件下,其發(fā)射光的熒光強(qiáng)度與物質(zhì)的濃度成正比。因此,這一檢測器只適用于具有熒光的有機(jī)化合物的測定,其靈敏度很高,痕量分析和梯度洗脫作品的檢測均可采用。
 
  5、分離系統(tǒng):該系統(tǒng)包括色譜柱、連接管和恒溫器等。色譜柱一般長度為10~50cm,內(nèi)徑為2~5mm,由不銹鋼或厚壁玻璃管或鈦合金等材料制成,住內(nèi)裝有直徑為5~10μm粒度的固定相。固定相中的基質(zhì)是由機(jī)械強(qiáng)度高的樹脂或硅膠構(gòu)成,它們都有惰性、多孔性和比表面積大的特點(diǎn),加之其表面經(jīng)過機(jī)械涂漬,或者用化學(xué)法偶聯(lián)各種基因或配體的有機(jī)化合物。因此,這類固定相對結(jié)構(gòu)不同的物質(zhì)有良好的選擇性。例如,在多孔性硅膠表面偶聯(lián)豌豆凝集素(psa)后,就可以把成纖維細(xì)胞中的一種糖蛋白分離出來。 
  另外,固定相基質(zhì)粒小,柱床極易達(dá)到均勻、致密狀態(tài),極易降低渦流擴(kuò)散效應(yīng)?;|(zhì)粒度小,微孔淺,樣品在微孔區(qū)內(nèi)傳質(zhì)短。這些對縮小譜帶寬度、提高分辨率是有益的。根據(jù)柱效理論分析,基質(zhì)粒度小,塔板理論數(shù)n就越大。這也進(jìn)一步證明基質(zhì)粒度小,會提高分辨率的道理。 再者,高效液相色譜的恒溫器可使溫度從室溫調(diào)到60c,通過改善傳質(zhì)速度,縮短分析時間,就可增加層析柱的效率。

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