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高效液相色譜實(shí)現(xiàn)對試樣的分析的同時也要注意維護(hù)

更新時間:2020-05-25        閱讀:3010

高效液相色譜(HPLC)是色譜法的一種,以液體為流動相,采用高壓輸液系統(tǒng),將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱,在柱內(nèi)各成分被分離后,進(jìn)入檢測器進(jìn)行檢測,從而實(shí)現(xiàn)對試樣的分析。該方法已成為化學(xué)、醫(yī)學(xué)、工業(yè)、農(nóng)學(xué)、商檢和法檢等學(xué)科領(lǐng)域中重要的分離分析技術(shù)。高效液相色譜的維護(hù)建議考慮以下方面:

 

一、流動相及樣品的制備要求

1.高效液相級色譜醇,二次蒸餾水,緩沖鹽一定要過濾,且流動相需要定期更換。

2. 流動相脫氣至關(guān)重要(可采用抽濾,超聲波脫氣等方法);

3. 樣品溶解后,用0.22微米的有機(jī)系膜或者水系膜過濾。

 

二、高壓恒流泵的維護(hù)和保養(yǎng)

1. 高壓恒流泵為整個色譜系統(tǒng)提供穩(wěn)定均衡的流動相流速,保證系統(tǒng)的穩(wěn)定運(yùn)行和系統(tǒng)的重現(xiàn)性。高壓輸液泵由步進(jìn)電機(jī)和柱塞等組成,高壓力長時間的運(yùn)行回逐漸磨損泵的內(nèi)部結(jié)構(gòu)。在升高流速的時候應(yīng)梯度升高,建議每次升高0.2mL/min,當(dāng)壓力穩(wěn)定時再升高,如此反復(fù)直到升高到所需流速。

2. 特殊情況下可拆下濾頭抽取以判斷其中是否堵塞;亦可用注射器吸取流動相通過吸濾頭打出以判斷其是否堵塞。若有堵塞情況可用異丙醇或甲醇超聲波清洗;清洗不成功則需要更換。

3.在儀器使用完了以后,要及時清洗管路并沖洗泵,保證泵的良好運(yùn)轉(zhuǎn)環(huán)境,保證泵的正常使用壽命。

 

三、色譜柱的維護(hù)和保養(yǎng)

1.所使用的流動相均應(yīng)為HPLC級或相當(dāng)于該級別的,在配置過程中所有非HPLC級的試劑或溶液均經(jīng)0.22um薄膜過濾,而且流動相使用前都經(jīng)過超聲儀超聲脫氣后才使用。

2.所使用的水必須是經(jīng)過蒸餾純化后再經(jīng)過0.22um水膜過濾后使用,所有試液均現(xiàn)用現(xiàn)配。并且在進(jìn)樣的樣品都必須經(jīng)過0.22um薄膜針筒過濾后進(jìn)樣。

3.所使用到的大流速為1.0mL/min,所以流速提升過程應(yīng)是梯度提升,不存在流速的突升突降。

4.儀器檢測完,需要用流動相梯度洗脫色譜柱1小時以上。

 

四、工作站的維護(hù)

 

出現(xiàn)死機(jī)可重啟計(jì)算機(jī);不正常運(yùn)行時,首先可更換電腦測試其硬件故障;或在本機(jī)上重新插拔接口、重新安裝軟件。

 

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